Peter Parker, un jeune étudiant, est un jour mordu par une araignée radioactive qui lui donne des super pouvoirs. En mémoire de son oncle Ben, mort dont il se sent responsable, il lutte contre le crime sous l'identité de Spider-Man, l'homme araignée. Pour subvenir à ses besoins et ceux de sa Tante May, il gagne de l'argent en vendant les photos qu'il prend de ses exploits en Spider-Man, au patron du Daily Bugle, Jonah Jameson. Ce dernier tente par tous les moyens de découvrir qui est Spider-Man, persuadé que celui-ci est un danger pour la société. Peter devra affronter de nombreux ennemis qui veulent le détruire tout en gardant son identité secrète pour préserver ses proches.
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Le Dr Curt Connors se transforme en Lézard après avoir ingéré une substance qui fit repousser son bras droit.
Spencer Smythe un brillant professeur crée une tarentule géante en métal pour détruire Spider-Man. Dans ses recherches il est soutenu par Norman Osborn qui lui donnera les ressources nécessaires au développement d'un fauteuil spécial pour son fils Alistair, devenu tétraplégique à la suite d'un accident dont Spencer se sent responsable.
À la suite de la mort tragique de son père, Alistair Smythe met au point deux nouvelles tarentules géantes ainsi qu'un scorpion géant. Soutenu par Wilson Fisk dit Le Caïd, il veut se venger de Spider-Man, qu'il tient pour responsable de la mort de son père.
Le Dr Otto Octavius, devenu le Dr Octopus, enlève Felicia Hardy, la fille de son ancienne patronne, Anastacia Hardy, dont il souhaite se venger.
Un criminel cambriole un musée en se faisant passer pour Spider-Man. Il s'agit en fait de Quentin Beck alias Mystério qui souhaite se venger de Spider-Man.
Humilié par Spider-Man, Mac Gargan accepte la proposition de Jameson de devenir le Scorpion.
Après avoir affronté des lions pour sauver la vie de sa femme, Sergeuï Kravinoff ressort grièvement blessé de ce combat. Pour lui sauver la vie, sa femme Mariah, le soigne avec un sérum miracle. Il va alors s'en sortir, mais cela va altérer sa personnalité en le faisant devenir plus fort et plus dangereux. Il devient alors Kraven, le chasseur. Tandis qu'il recherche sa femme, il va être amené à croiser la route de Spider-Man avec qui il échangera quelques coups.
L'astronaute John Jameson, le fils de J. Jonah Jameson, fait une étrange découverte sur la Lune, qu'il s'empresse de ramener avec lui. Il s'agit en fait d'un minerai spécial qui pourrait bien détruire la planète entière. Convoité par Wilson Fisk, il envoie alors l'un de ses hommes récupérer le fameux minerai. Atterrissant en catastrophe sur le pont de Brooklyn à la suite d'un problème, Jameson et son collègue sont attaqués par une substance noirâtre visqueuse du à leurs trouvailles. Tandis que Rhino, un homme avec une force colossale habillé d'une combinaison de rhinocéros, engagé par Fisk, récupère ce caillou, il fait la rencontre de Spider-Man. Sortant perdant de ce combat, l'homme-araignée va se retrouver englué de cette fameuse matière ramenée de l'espace et va être accusé à tort par Jameson d'être le voleur du précieux caillou.
La fameuse substance noirâtre a pris possession de Spider-Man, faisant de lui un héros plus fort, mais aussi plus dangereux. Examiné par le professeur Connors, ce dernier met en garde Spider-Man contre cette matière qui ne fait qu'un avec l'hôte qu'elle croise. En se débarrassant du symbiote, Peter, ne sait pas qu'à cet instant il vient de créer involontairement l'un de ses pires ennemis en la personne de Venom.
Eddie Brock, devenue Venom après que le symbiote ait pris possession de lui à la suite du retrait de ce dernier par Spider-Man, découvre l'identité de l'homme-araignée. Engageant un combat sans merci, Brock alias Venom veut non seulement se venger de Parker, mais aussi prouver qu'il est plus fort et plus malin que lui.
Un homme vêtu d'un déguisement ridicule et volant dans les airs à l'aide d'un planeur, fait irruption lors d'une inauguration pour tuer Wilson Fisk, ce dernier est sauvé de justesse par Peter. L'homme en question a été engagé par Norman Osborn, mais décide de s'allier à Fisk après qu'Osborn ait refusé de lui donner du matériel plus sophistiqué. Après un combat dangereux face à Spider-Man, il le laissera pour mort...
Un homme vêtu d'un déguisement ridicule et volant dans les airs à l'aide d'un planeur, fait irruption lors d'une inauguration pour tuer Wilson Fisk, ce dernier est sauvé de justesse par Peter. L'homme en question a été engagé par Norman Osborn, mais décide de s'allier à Fisk après qu'Osborn ait refusé de lui donner du matériel plus sophistiqué. Après un combat dangereux face à Spider-Man, il le laissera pour mort...
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